lncRNA与病毒感染的套路
长非编码RNA（lncRNA）参与各种生物学和病理学过程。乙型肝炎病毒(HBV)是一种具有部分双链的DNA病毒，可发展为慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的危险因素。最近报道表明，某些lncRNA在HBV相关疾病中起着重要作用。lncRNA与病毒感染的研究套路你晓得吗？这篇文章为您揭晓。
思维路线：
结果：
1. HBV感染诱导lncRNA HOTTIP上调
HBV（+）HCC组织和HCC细胞中HOTTIP的水平明显升高，HBV初次感染后HOTTIP升高，而继发感染后HOTTIP升高更多。这些结果表明，HOTTIP在HBV阳性组织和细胞中上调。
2. HBV DNA聚合酶通过CREB1诱导HOTTIP表达
将HOTTIP启动子克隆到萤光素酶报道载体（HOTTIP-LUC +）中，荧光活性因pHBV1.3的存在而增加，pHBV1.3还增加HOTTIP的mRNA水平，HBV DNA pol（DNA聚合酶）可显著增加HOTITP的mRNA水平。将HOTTIP启动子与表达不同HBV蛋白质的质粒共转染Huh7细胞，检测它们对HOTTIP表达的影响，发现HBV DNA pol确实增加HOTTIP启动子活动，其他效果不明显。推定两个CREB1结合位点存在于HOTTIP启动子区域，Hueb7细胞中CREB1的过表达激活HOTTIP启动子，突变CREB1的结合位点时，HOTTIP-Luc荧光活性被削弱。CREB1的异位表达增加Huh7细胞中HOTTIP mRNA的水平。HBV DNA pol可消除CREB1突变对HOTTIP启动子活性的促进作用。转录抑制剂Dactinomycin D处理Huh7细胞后，CREB1 mRNA的稳定性增强，提示HBV DNA pol对CREB1的上调可能是由于CREB1 mRNA稳定性增加。这些表明HBV DNA pol绑定并稳定CREB1 mRNA以促进其翻译，进而诱导HOTTIP表达。
3. HOTTIP和HBV DNA pol抑制HBV复制
研究HOTTIP对HBV基因表达和复制的影响。萤光素酶报告基因检测表明，过表达HOTTIP抑制HBV Enh I / Xp活性，HOTTIP敲低则增加；但是，HBV SP1，Sp2和CP的活性没有明显变化。培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平在HOTTIP过表达后减少，在HOTTIP敲低后增加。HOTTIP过表达的细胞中HBV pgRNA和总RNA减少，上清液中HBV DNA拷贝减少，DNA复制中间产物也减少。在HOTTIP敲低后效果相反。这些结果证明HBV DNA pol促进HOTTIP表达，并且HOTTIP反过来会抑制HBV复制。HBV DNA pol的过表达显著降低HBsAg和HBeAg的水平，降低pgRNA、总RNA和HBV DNA拷贝。这些表明HOTTIP和HBV DNA pol可抑制HBsAg和HBeAg的产生以及HBV基因组复制。
4. HOXA13表达与HBV复制有关
将pHBV1.3质粒转染到Huh7细胞中，HOXA13水平升高。HOXA13敲低可提高pHBV1.3转染的Huh7中HBsAg、HBeAg的水平、HBV DNA拷贝水平。HOXA13抑制HBV Enh I / Xp活性，而敲低HOXA13则增强。HOXA13降低DNA复制中间体的水平。这些表明HOXA13抑制HBsAg、HBeAg的产生和HBV基因组复制。
5. HOXA13通过与HBV Enh I / Xp结合来介导HOTTIP对HBV复制的影响
HOTTIP可通过促进肝细胞中HOXA13的表达发挥其功能。HOTTIP过表达导致HOXA13蛋白质和mRNA积累，敲除HOTTIP具有相反作用。探讨HOXA13促进HBV基因表达复制的机制，发现HOXA13过表达抑制HBV Enh I / Xp活性，突变HOXA13结合位点消除对HOTTIP和HOXA13对Enh I / Xp活性的刺激作用。这些证明HOXA13通过直接绑定到Enh I / Xp以介导HOTTIP对HBV病毒蛋白产生和复制。
