m6A单碱基PCR检测技术服务

栏目:英拜特色服务 发布时间:2022-09-28
SELECT–m6A PCR 能够实现低丰度转录本中 m6A 单碱基分辨率的检测......

m6A单碱基PCR检测技术服务

目前RNA甲基化检测一般依赖于m6A特异性抗体,但这种方法通常只能对高甲基化区域进行鉴定,不能精确到单个位点的m6A检测。SELECT–m6A PCR——single-base elongation-and ligation-based qPCR amplification method,即单碱基延长和连接的 qPCR 扩增技术,能够实现低丰度转录本中 m6A 单碱基分辨率的检测。原理如下图所示:

1. SELECT 技术原理图

该方法简单快捷,用时只需三小时,能够实现低丰度转录本中 m6A 单碱基分辨率的检测。该方法基于 m6A 修饰的两点特性:(i)能够阻碍 DNA 聚合酶在反转录过程的单碱基延伸;(ii)能够降低缺口连接酶的连接效率。SELECT 方法采用荧光定量 PCR 的方法进行定量。

 技术优势

1. 荧光定量 PCR 进行精确定量,达到单碱基分辨率

2. 无需抗体 IP,无需同位素标记,降低成本,可操作性高

3. 灵敏度高,总 RNA 所需样本低至 1μg 

技术服务送样要求

1. RNA≥1μg / 样本;

2. 细胞,≥2.5×105 个细胞 / 样本

 

参考文献:

Xiao, Y., Wang, Y., Tang, Q., Wei, L., Zhang, X., & Jia, G. (2018). An Elongation- and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6 -Methyladenosine Modification. Angewandte Chemie (International ed. in English), 57(49), 15995–16000.

Wang Y, Xiao Y, Dong S, Yu Q, Jia G. Antibody-free enzyme-assisted chemical approach for detection of N6-methyladenosine. Nat Chem Biol. 2020;16(8):896-903. doi:10.1038/s41589-020-0525-x

Xu W, Li J, He C, et al. METTL3 regulates heterochromatin in mouse embryonic stem cells. Nature. 2021;591(7849):317-321.