大鼠肾小管上皮细胞 RRTEpiC

大鼠肾小管上皮细胞是从人出生2天大鼠的肾中分离得到的，一代冻存，冰冻运输。每管细胞密度超过5×10^5/ml。该细胞可通过细胞因子-18、-19和波形蛋白特异性抗体的免疫荧光进行鉴定。本细胞经检测不含支原体、细菌、酵母菌和真菌。如采用ScienCell实验室特制的培养基，可保证此细胞继续增殖。然而，由于该细胞传代后可限制膨胀能力与衰老，故不建议将此细胞继续培养。

取材：1.肾小管节段的分离(机械网筛滤过法)：

①取 Wistar 大鼠断颈法处死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分钟。

②将大鼠转移入超净工作台，取腰部切口迅速取出肾脏，置于盛有生理盐水的培养皿中清洗并除去包膜和肾蒂组织。

③取皮质置于80目筛网上，剪碎成1-2mm3大小组织块，网下放盛有少量生理盐水的培养皿。

④用玻璃注射器内芯于80目网上充分研磨组织。

⑤收集 80 目网下液体转移至 100 网筛上，用生理盐水冲洗。

⑥将100目网上组织用生理盐水冲洗入另一培养皿中，收集置入离心管中。1500 转/分钟离心5分钟，弃去上清。

2 肾小管节段的消化及培养

①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重悬沉淀，37℃温箱中消化约10分钟。

②加入3ml(双倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 转/分离心8分钟，弃上清。

③加入约3ml RPMI1640 悬浮沉淀，并用吸管充分吹打混匀，接种于培养瓶中。

④分离肾小管节段接种于培养瓶后，第一天加入少量培养基，置入37℃,5%CO2孵育箱中静置培养。

⑤培养过夜后，第二天加入足量的培养基，静置培养。

⑥培养 72 小时后首次换液，以后每两天换液一次。

⑦约第六到七天细胞生长基本融合成单层。