活跃翻译组测序Active Ribo-seq

      常规翻译组（Ribo-seq）可通过高通量测序技术对正处于翻译状态的mRNA进行研究，可以间接反应蛋白质的表达水平。活跃翻译组（Active Ribo-seq） RiboLace技术是利用一种能结合处于翻译活性状态核糖体结合的嘌呤霉素的类似物3P,并通过pull down 分离活跃状态的核糖体，但不会分离翻译停滞状态的核糖体。活跃翻译组可以用于研究细胞，组织样本中mRNA翻译状态，并预测蛋白表达水平。

技术优势
1. 识别处于翻译转态的RNA分子，准确描绘翻译中的核糖体图谱
2. 样本量要求更低，可低至单细胞水平
3. 高精度的活跃核糖体图谱，达到单碱基分辨率

实验流程

研究案例
单细胞转录组和翻译组学跨组学联合揭示人卵母细胞成熟的潜在机制
      将转录组和翻译组跨组学联合分析比单独使用转录组更准确，特别是在哺乳动物卵母细胞这类受翻译调节控制的细胞类型。在这项研究中，研究者结合了RiboLace和转录组测序，揭示了小鼠和人类卵母细胞之间不同的翻译表达模式，并阐述了人类卵母成熟过程中从细胞质到细胞核的时空顺序调节，还发现了OOSP2诱导因子在人卵母细胞成熟中的作用。针对单卵母细胞RiboLace和转录组测序分析进一步阐明，OOSP2通过翻译调节诱导包括了小GTP酶的特异信号通路。

图1 A. 活跃翻译组Ribo-seq重复相关性散点图 B.P-sites 在基因上分布图 C.P-sites在翻译起始位点区域密度分布图

图2  A. 转录组与活跃翻译组联合分析RPKM热图  B. 差异翻译效率基因聚类图

分析内容
数据质控
基因比对与统计
RPF长度分布
全基因组翻译活性分析
差异翻译效率基因分析
差异基因GO分析
差异基因KEGG分析

送样要求：
活跃翻译组：1×10⁶细胞，50mg组织