m6A单碱基PCR检测技术服务

m6A单碱基PCR检测技术服务

目前RNA甲基化检测一般依赖于m6A特异性抗体，但这种方法通常只能对高甲基化区域进行鉴定，不能精确到单个位点的m6A检测。SELECT–m6A PCR——single-base elongation-and ligation-based qPCR amplification method，即单碱基延长和连接的 qPCR 扩增技术，能够实现低丰度转录本中 m6A 单碱基分辨率的检测。原理如下图所示：

图 1. SELECT 技术原理图

该方法简单快捷，用时只需三小时，能够实现低丰度转录本中 m6A 单碱基分辨率的检测。该方法基于 m6A 修饰的两点特性：（i）能够阻碍 DNA 聚合酶在反转录过程的单碱基延伸；（ii）能够降低缺口连接酶的连接效率。SELECT 方法采用荧光定量 PCR 的方法进行定量。

 技术优势

1. 荧光定量 PCR 进行精确定量，达到单碱基分辨率

2. 无需抗体 IP，无需同位素标记，降低成本，可操作性高

3. 灵敏度高，总 RNA 所需样本低至 1μg 

技术服务送样要求

1. 总 RNA，≥1μg / 样本；

2. 细胞，≥2.5×105 个细胞 / 样本

参考文献：

Xiao, Y., Wang, Y., Tang, Q., Wei, L., Zhang, X., & Jia, G. (2018). An Elongation- and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6 -Methyladenosine Modification. Angewandte Chemie (International ed. in English), 57(49), 15995–16000.

Wang Y, Xiao Y, Dong S, Yu Q, Jia G. Antibody-free enzyme-assisted chemical approach for detection of N6-methyladenosine. Nat Chem Biol. 2020;16(8):896-903. doi:10.1038/s41589-020-0525-x

Xu W, Li J, He C, et al. METTL3 regulates heterochromatin in mouse embryonic stem cells. Nature. 2021;591(7849):317-321.