Southern Blot是检测基因组样本中特定DNA序列的一种方法。主要原理是根据碱基互补配对原则,具有一定同源性的两条核酸单链在适宜环境中可杂交形成双链。通过凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的待检DNA分子,转移至尼龙膜或其他固相支撑物上,固定后与标记好的探针进行杂交,利用放射自显影或酶反应显色, 从而检测特定DNA分子的含量。
Southern Blot实验流程
基因组提取:基因组要求完整性好,纯度高
基因组酶切
电泳分离酶切好的DNA样品: 20~40ug/泳道, 25-30V稳压电泳12-24h。
转膜
探针制备
预杂交
杂交
检测