肾小管上皮细胞的外泌体CCL2对于白蛋白诱导的肾小管间质炎症是至关重要的

蛋白尿与肾小管间质炎症密切相关，但蛋白尿对肾损伤的作用机制尚不清楚。2018年3月东南大学医学院刘必成教授在J Am Soc Nephrol. （IF=8.65）上发表论文，本研究探讨了肾小管上皮细胞（TEC）外泌体在小鼠肾脏损伤模型和IgA肾病患者中向巨噬细胞传递炎症信号的新作用。本研究表明，在蛋白尿肾疾病的背景下，由CCL2 mRNA包裹的TECs释放出更多的外泌体，可将其传递给间质大噬细胞。TEC外泌体可能是白蛋白诱导的Tu-球蛋白间炎症的一个关键机制，可以为限制CKD的进展提供新的治疗靶点。

技术路线：

结果：

Fig1. 在AKI模型中， CCL2mRNA的外泌体增多

A 组织学（PAS染色）和免疫组织病理（CD68+免疫抑制）变化；B 炎性细胞因子mRNA的变化6）通过实时PCR在肾脏内的表达；C NGAL蛋白和基因的表达变化；D 外泌体的电子显微鉴定；E WB检测外泌体标志蛋白CD9、CD63；F NAT鉴定外泌体；G PCR检测炎症细胞因子

Fig2. 慢性肾病模型中CCL2mRNA释放的外泌体增多。

A，B PAS和Masson染色；C PCR检测炎症细胞因子；E WB鉴定外泌体；F NAT鉴定外泌体；G PCR检测外泌体中的炎症细胞因子

Fig 3 与其他炎症因子相比，TEC外泌体中的CCL2 mRNA含量最多

A TEC细胞中各种炎性因子miRNA表达情况；B 在TEC细胞的外泌体中各种炎性因子miRNA表达情况

Fig4. CCl 2 mRNA通过TEC外泌体转移到巨噬细胞

A 在巨噬细胞中添加荧光标记的外泌体；B PCR检测炎症细胞因子；C 流式细胞术显示BSA处理组巨噬细胞中荧光标记的外泌体增多并被巨噬细胞吞噬;D 在mRNA水平上，siRNA在TECs和TEC外泌体中有效地敲除CcL2；E TEC外泌体治疗24小时后巨噬细胞进行迁移分析；F 用GFP标记的CCL2质粒转染TECs；G 显示在TECs、TEC外体和与TEC外体处理的RAW264.7中配对的GFP和CcL2配对引物检测GFP-CCl 2融合的mRNA水平。

Fig 5. BSA处理的TECs外泌体引起小鼠肾损伤.

A 在离体体注射12小时后，用定量RT-PCR法检测小鼠肾脏中CCR2 mRNA的表达；B PAS染色肾脏组织学表现无明显的组织学改变；C PAS染色和免疫组化；D PCR显示，与Ctrl EXO组相比，BSA离体小鼠肾脏中CCR2 mRNA的表达增加；E BSA外周小鼠NGAL表达与外泌体注射后72小时CTRL EXO小鼠相比显著增加

Fig 6从CC2敲除TECs的外泌体转移减少了肾脏炎症。

A PAS染色，来自TECs的外泌体与CCL2敲除（SIRNAY-TEC EXO）部分地减少了间质巨噬细胞浸润；B 流式细胞术证实，与接受NCX-TEC EXO处理的小鼠相比，接受siRNAE-TEC EXO的小鼠的肾脏中CD68 +巨噬细胞的浸润部分减少；C RT-PCR分析显示，CcL2和NGAL mRNA呈下降趋势，但无统计学意义；D 与NCY-TEC EXO组相比，接受siRnAE-TEC EXO的小鼠肾脏NGAL蛋白部分减少（无显著性）。

Fig7. 外泌体CCL2mRNA与IgA肾病患者的蛋白尿和管状组织炎症的严重程度相关。

A WB鉴定外泌体；B NTA鉴定外泌体；C 在尿液中释放的外泌体的数量与蛋白尿水平密切相关；D PCR显示，与对照组相比，IgAN患者尿中的外泌体CCl 2 mRNA上调；E IgAN患者肾脏中CD68 +巨噬细胞浸润的代表性图像。