外泌体转运lncRNA-PTENP1抑制膀胱癌的进展
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-11-19
即使外泌体能够包装长链非编码RNA(lncRNAs)去调节细胞内的交流,但是外泌体lncRNA PTENP1在膀胱癌(BC)中的角色还不清楚......

即使外泌体能够包装长链非编码RNA(lncRNAs)去调节细胞内的交流,但是外泌体lncRNA PTENP1在膀胱癌(BC)中的角色还不清楚。鉴于这一点,Jing Qian和Zhengdong Zhang等人带领他们的团队,研究了外泌体lncRNA-PTENP1在BC中的角色,并将研究成果于2018年10月3日发表在了Molecular Cancer杂志(IF=7.76)上。在本次研究中,作者首先检测了PTENP1在BC和健康对照组的表达,发现PTENP1发生在组织和血浆外泌体中。通过ROC和AUC分析,作者评估了PTENP1的诊断准确度。为了决定外泌体PTENP1的功能,作者做了细胞表型和动物实验。发现PTENP1在BC病人组织和BC病人来源的血浆外泌体中显著下调;作者发现PTENP1主要被外泌体包装。外泌体PTENP1在BC病人和健康对照组中不同。正常细胞分泌的外泌体PTENP1,并且能够将其转运到BC细胞中,因此通过细胞凋亡和降低细胞迁移和侵袭能力抑制BC细胞的恶性行为。在体内,外泌体PTENP1能够抑制肿瘤生长。外泌体PTENP1能够通过结合miR-17调节PTENP1的表达。因此,作者得出结论,外泌体PTENP1可以考虑作为BC治疗的一个新的biomarker。来源于正常细胞的外泌体能够将PTENP1转运到BC细胞中,能够在体内体外降低BC的紧张。在BC致癌过程中,外泌体PTENP1能够参与正常细胞到膀胱细胞的交流。


技术路线

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实验结果
1. 血浆外泌体lncRNA- PTENP1在膀胱癌中显著,并且可以考虑作为膀胱癌的biomarker

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1 血浆外泌体PTENP1BC病人中的表达。

A. 外泌体的显微图片。B. WB检测外泌体的marker(TSG和CD63)。C. qRT-PCR检测外泌体PTENP1的表达。E. 在0、4、8、24h的血浆外泌体中PTENP1的表达。F. 外泌体PTENP1反复冻融0、2、4、8次后检测外泌体PTENP1的表达。


2. 过表达PTENP1能够抑制膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭 

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2 PTENP1BC细胞表型的效应。

EJ和J82细胞中转染PTENP1表达质粒或NC载体。A. qRT-PCR检测PTENP1在mRNA水平上的表达。B. CCK-8实验检测细胞的活性。C. 克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。D. transwell实验检测EJ和J82细胞的侵袭能力。E. transwell实验检测EJ和J82细胞的迁移能力。F.流式细胞术检测EJ和J82细胞的凋亡能力。G. 流式细胞术检测EJ和J82细胞的细胞周期。


3. 膀胱癌细胞能够摄取正常细胞分泌的外泌体

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3 外泌体PTENP1作为细胞内交流调节器。

外泌体从293A, J82和EJ细胞中分离。A. qRT-PCR检测加入 RNase (2 μg/ml)和共同加入Triton X-100 (0.1%) 20min后,293A, J82和EJ细胞培养基中PTENP1的表达。B. 293A, J82和EJ细胞培养基中分离的外泌体的显微图片。C. WB检测细胞系中的外泌体的marker(TSG101和CD63)。D. qRT-PCR检测293A, J82和EJ细胞培养基中外泌体PTENP1的改变倍数。E. 293A细胞外泌体被PKH67标记后孵育J82和EJ细胞3h。


4. 过表达外泌体PTENP1能够抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭

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4 外泌体PTENP1对膀胱癌细胞表型中的影响。

外泌体从转染PTENP1表达质粒和NC载体的293A细胞中分离。293A细胞的外泌体分离后孵育EJ和J82细胞24h。A. CCK-8实验检测细胞的活性。B. qRT-PCR检测PTENP1在mRNA水平上的表达。C. 克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。D. transwell实验检测EJ和J82细胞的侵袭能力。E. transwell实验检测EJ和J82细胞的迁移能力。F.流式细胞术检测EJ和J82细胞的凋亡能力。G. 流式细胞术检测EJ和J82细胞的细胞周期。


5. 体内上调PTENP1或外泌体PTENP1都能抑制膀胱癌的发展

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5 在体内过表达PTENP1和外泌体PTENP1对肿瘤的影响。

过表达PTENP1和外泌体PTENP1转染到EJ细胞中,命名为NC、PTENP1 vector。外泌体从转染PTENP1/NC病毒载体的293A细胞中分离,命名为NC-Exos 、PTENP1-Exos。A. 接种NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后的裸鼠成瘤实验。B. 接种NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后的异种移植实验。C. 每两天检测肿瘤的体积。D. 每15天检测终究得中重量。E. qPCR检测接种NC, PTENP1-Exos, PTENP1 vector和NC-Exos后检测裸鼠肿瘤中的PTENP1和PTENP的表达。F. HE染色和免疫组化分析ki67和PTENP在肿瘤组织中的表达。


6. PTENP1通过吸附miR-17上调PTEN的表达

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6 外泌体PTENP1通过miR-17调节PTEN的表达。

A. WB检测转染PTENP1表达质粒和NC载体的EJ和J82细胞中PTEN的表达。B. WB检测转染外泌体PTENP1和外泌体NC的EJ和J82细胞中PTEN的表达。C. miR-17结合PTENP的3’-UTR。D. WB检测转染外泌体PTENP1和miR-17 mimics的EJ和J82细胞中PTEN的表达。


7. 在膀胱癌细胞中,来自于转染PTENP1载体的正常细胞中的外泌体PTENP1能够提高PTENP1的表达

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7 外泌体PTENP1调节的膀胱癌进展的示意图。

外泌体PTENP1通过ceRNA机制,吸附miR-17和调节PTEN的表达,进一步抑制膀胱癌的进展。