外泌体及内容物的可视化——基于全内部反射荧光的单囊泡成像测定技术

 外泌体（exosome）是一类由细胞分泌的30-150nm的小囊泡，exo在离开“母体细胞”时将带走细胞内的部分蛋白质和复杂RNA，经膜融合释放到胞外基质中，去到它想去的地方。这使得exo从默默无闻的小龙套成为研究细胞间对话（cross-talk）的大热主角之一。
目前常用的的研究手段如q-PCR虽然可以对exo内含物的含量进行研究，但并不能在单囊泡水平对内含物进行原位化学计量，也就是说无法揭示单囊泡水平的表型异质性。今天小编给大家带来的是一项能进行原位化学计量的技术：基于全内部反射荧光（TIRF）的单囊泡成像测定技术。
我们先来看一下该技术在研究肿瘤血浆exo中的应用：

首先，我们用CD63探针捕获血浆中的exo，将exo固定在盖玻片上；紧接着，加入可激活的适体探针（AAP）来检测靶向含有PTK7的exo，当遇到PTK7-exo时，APP被激活，发出荧光。这是DNA纳米装置（ABDNs）放大荧光信号，在TIRF成像系统下检测生成的ABDN即可用于定量分析。这一技术甚至可以直接观察和量化微量血浆样品（1μl）中的exo。
接下来，我们再来看一下如何用这一技术直接测定血清中外泌体内的microRNAs：首先，确定要研究的microRNA，设计与靶miRNA特异结合的DNA酶探针，用0.2 U mL -1 SLO通过可逆透化方法将DNA探针递送到exo中，当探针与靶miRNA特异结合时激发荧光，通过TIRF成像系统下检测荧光数和密度即可。

小编相信，随着各种技术的不断发展和成熟，人们对于exo的研究将更加深入和透彻。毕竟“科学技术是第一生产力”嘛！