m6A研究又有新手段了？赶紧来了解一下吧！

RNA甲基化m⁶A是如今的研究热点之一，目前主要的研究思路包括差异表达的write，reader和eraser基因分析；m⁶A抗体检测全转录组甲基化水平；分析m6A甲基化水平变化的靶基因和下游机制研究。而在7月25日的Cell上新发表了一篇介绍不使用m⁶A抗体的检测mRNA m⁶A水平的Resource文章，小编第一时间和大家分享一下。

 作者开发这一方法的前提是有研究报道了MazF能特异性的识别无修饰的ACA序列并发挥RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的第一个A发生m⁶A甲基化之后将无法被MazF所识别，如图一所示。

                                                                                                          图1 MazF RNA酶作用示意图
 根据这一原理，作者将纯化后的mRNA进行MazF酶处理，然后再对打断的RNA进行逆转建库测序。对于无修饰的位点，ACA处被完全剪切，测序reads正好分布于该位点上下游而且比对至该处的上下游reads数是相同的.如图2所示。而甲基化位点的reads会包含上下游的序列。作者开发了MAZTER-MINE软件包专门进行分析（图3）。

                                               图2 MAZTER-Seq实验流程图

                                                                                                                 图3 MAZTER-MINE分析m6A示意图
       接下来作者便是要验证这一新方法的可行性了。在酵母中敲除IME4的情况下，检测到的剪切效率显著高于野生型（剪切效率高代表低m⁶A水平），m⁶A抗体富集后的样品剪切效率也显著低于未富集的Input组。整体水平可靠，那检测的特异性位点是否准确呢？作者也将该方法检测到的新甲基化位点使用放射标记层析检测，发现预测的位点准确存在而且与剪切效率相符合。如图5所示。而图6中，作者则是与m⁶A抗体IP的方法进行了比较，也证实了这一方法的可行性。

                                                                                                                                                     图5 MAZTER-Seq检测结果验证

                                                                                                             图6 MAZTER-Seq与m⁶A-Seq比较分析
       此外，后文中作者也在大规模的CRISPR-Cas9改变m⁶A状态和酵母减数分裂模型中检测了MAZTER-Seq这一系统；并进一步通过这一方法检测了哺乳动物不同细胞间m⁶A水平的保守性；也探究了去甲基化酶FTO对整体m⁶A甲基化水平的影响等。这里小编主要给大家分享这一新技术，其他部分暂不过多分析了。新的技术能大大拓展我们的研究内容；对于这一技术，不知大家怎么看呢？