circRNA研究思路知多少
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-03-27
环状RNA(circRNA)是一类非编码RNA,可以参与各类生理和病理过程,包括肿瘤发生和癌症进展等,备受科学界的关注......

   环状RNA(circRNA)是一类非编码RNA,可以参与各类生理和病理过程,包括肿瘤发生和癌症进展等,备受科学界的关注。对于circRNA的研究正在火热进行中,那么关于它的研究思路知多少呢?一篇发表在Molecular Cancer上面的文章带我们了解熟悉这个明星分子。

研究思路:

结果:
1. 非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)衍生的circRNA的鉴定

   circFGFR1(hsa_circ_0084003)在NSCLC肿瘤组织的表达上调,circFGFR1高的NSCLC患者有较大的肿瘤、淋巴结转移和细胞分化不良,circFGFR1高表达的患者预后明显比低表达的差,circFGFR1表达是术后复发和总生存期的独立预测因子。这些表明circFGFR1可能参与了非小细胞肺癌的进展。


2. 体内外CircFGFR1促进NSCLC细胞增殖,迁移和侵袭
   NCI-H358和NCI-H1299细胞过表达circFGFR1,促进了增殖,迁移和侵袭。癌细胞皮下植入裸鼠,发现circFGFR1过表达显著促进肿瘤生长和肺转移。


3.CircFGFR1充当多种miRNA的海绵
   使用RIP circFGFR1下拉实验,纯化circFGFR1相关的RNA,发现circFGFR1和miR-381-3p的富集,表明miR-381-3p是NSCLC细胞中与circFGFR1相关联的关键miRNA之一;RNA免疫沉淀结果显示circFGFR1和miR-381-3p显著富集;萤光素酶实验显示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1细胞荧光素酶活性;使用生物素化的miR-381-3p模拟物下拉分析发现circFGFR1显著富集;FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC细胞中;circFGFR1过表达或沉默不影响miR-381-3p表达,miR-381-3p上调或敲低后circFGFR1没有显著变化。这些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不会降解彼此。以上所有实验表明NSCLC细胞中circFGFR1可能充当miR-381-3p的海绵。


4. CircFGFR1海绵miR-381-3p上调CXCR4表达
   StarBase v3.0,PITA和miRanda算法被用来预测miR-381-3p靶基因,几种致癌基因UBE2C,FGF7,FGFR2,FGFR1,IGF2BP1,MET和CXCR4 3'UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3荧光素酶报告基因显示转染了野生型(wt)3'UTR序列的细胞的荧光活性能被miR-381-3p模拟物抑制;CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p过表达细胞中降低,CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1过表达后明显增加;在NSCLC患者组织样本中发现circFGFR1和CXCR4正相关。


5.敲除CXCR4可逆转circFGFR1诱导的非小细胞肺癌细胞的增殖,迁移和侵袭
   CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299细胞过表达circFGFR1 恶性表型与对照细胞无明显差异。


6.较高水平的circFGFR1表达与细胞毒性T淋巴细胞排斥和抗PD-1 NSCLC治疗相关
   调查circFGFR1 / CXCR4轴和免疫逃逸之间的关系,NSCLC组织中CD8 + T数明显低于邻近的非肿瘤组织,NSCLC组织circFGFR1 /CXCR4表达和CD8 + T细胞之间存在负相关,miR-381-3p表达与CD8 + T显示出正相关,这些提示circFGFR1可能通过海绵miR-381-3p上调CXCR4发挥其免疫抑制作用。进评估circFGFR1表达对抗PD-1治疗抵抗力的作用,分析PD-1抗体在接受LLC-circFGFR1细胞异种移植小鼠中的抗肿瘤作用,发现LLC-circFGFR1组肿瘤生长表现出明显的对PD-1抗药性表型,生存时间较短。