追踪循环体外泌体PD-L1的演变以监测黑色素瘤患者

    免疫治疗近年来受到广泛关注，免疫检查点在免疫治疗中扮演着关键角色，PD-1/PD-L1是免疫检查点的重要组成部分。研究表明，从癌症患者的血液样品中分离出细胞外囊泡PD-L1表达可与肿瘤特征相关。今天我们讲一篇关于黑色素瘤患者血浆中分离出的外泌体中PD-L1水平是否可以预测患者对免疫疗法的反应的临床研究论文，题名为：Tracking the evolution of circulating exosomal-PD-L1 to monitor melanoma patients。发表在Journal of Extracellular Vesicles期刊，影响因子14.976。
    文中从不同的细胞系中纯化了外泌体，例如人和鼠类黑色素瘤（SK-MEL-2，B16F10），人肺癌（A549和MRC-5）。WB检测外泌体的标志物TSG101，Alix，CD9和CD63，Grp94用作阴性对照。PD-L1在三个癌细胞系外泌体中表达，不在非癌性细胞系中表达。随后分析了健康供体中分离出的外泌体（n=5），黑色素瘤患者（n=6）和肺癌患者（n=6）的合并血样中分离出的外泌体中PD-L1的表达。仅在分离自癌症患者的外泌体中检测到PD-L1。

    为了确定PD-L1是否在囊膜上表达，使用了干扰生物层方法来捕获带有PD-L1重组蛋白的外泌体。结果表明，PD-L1存在于肿瘤来源的外泌体膜上。将PD-L1外泌体与原代T细胞共培养，通过检测PD-1，Ki67和IFNγ的表达确定，外泌体在抑制T细胞活化方面与癌细胞一样有效。这些结果表明PD-L1在衍生自癌细胞的外泌体中分泌，并且该分子是有功能的，因为它能够介导T细胞免疫抑制。
    为了研究ExoPD-L1作为潜在的生物标志物，开展了一项临床研究。纳入了100名黑色素瘤患者。在这些患者中，43％接受了抗PD-1抗体，10％的接受ipilimumab和18％接受BRAF和MEK抑制剂治疗。
    首先，比较了血液样本中外泌体PD-L1表达与组织中PD-L1肿瘤的表达。在血浆样品中，通过ELISA比较可溶性PD-L1和外泌体中PD-L1的表达水平。外泌体中PD-L1表达显著高于血浆中PD-L1。在所有患者中均检测到ExoPD-L1表达。而在肿瘤活检中只有67％的PD-L1阳性。我们得出的结论是，PD-L1在循环外泌体中比在活检中或溶于血浆时更容易检测和定量。

    评估了ExoPD-L1表达的变化是否可以预测肿瘤对治疗的反应。从46例患者中获得了治疗前后的两个血液样本（S1 + S2）。S1和S2之间的中位间隔为4.5个月。S2样本不可用的原因是患者死亡（n = 23）或患者失去随访（n = 31）。在这46例患者中，有36例接受了抗PD-1治疗。其他患者接受了伊匹木单抗（n = 2），抗BRAF和抗MEK靶向治疗（n =8）。肿瘤进展的患者中ExoPD-L1显着增加，并且ExoPD-L1与疾病状态显着相关。使用ROC曲线分析， ExoPD-L1可以很好地区分患者的疾病状态。

    最后，通过测量ExoPD-L1水平的变化探索了追踪疾病发展的可能性。对血液样本中的ExoPD-L1进行了定量，图像扫描中检测到的肿瘤反应与循环中ExoPD-L1的水平降低相关。抗PD-1治疗后，ExoPD-L1水平与对治疗反应之间的这种负相关。

    ExoPD-L1的水平与对治疗的反应呈负相关：成像扫描分析确定ExoPD-L1的增加与肿瘤进展有关，而减少与肿瘤消退有关。PD-L1的循环率可能反映了由不同疗法引起的涉及CD8 + T细胞的抗肿瘤免疫力。