IGF2BP2通过充当m6A阅读器来调节DANCR
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-11-18
RNA m6A甲基化修饰哺乳动物RNA最主要的化学修饰方式,修饰大约60%的RNA,目前发现microRNA,circRNA, rRNA, tRNA和snoRNA上都有发生m6A修饰......

    RNA m6A甲基化修饰哺乳动物RNA最主要的化学修饰方式,修饰大约60%的RNA,目前发现microRNA,circRNA, rRNA, tRNAsnoRNA上都有发生m6A修饰。研究发现m6A在肿瘤发生发展和耐药中发挥重要作用。今天我们讲一篇关于IGF2BP2是否可以通过m6A修饰lncRNA的表达,导致胰腺癌中癌症干细胞(CSC)的自我更新的文章。文章题名为:IGF2BP2 regulates DANCR by serving as an N6-methyladenosine reader,发表于cell death and differentiation期刊,影响因子10.717。

    IHC染色确定了IGF2BP2在胰腺癌组织中高表达,并且显著降低患者生存期。cBioPortal数据库显示,高水平的IGF2BP2与不良的总生存率(OS)显着相关,与Kaplan–Meier数据库分析结果一致。这些结果突出了IGF2BP2在胰腺癌中的临床意义。

    在BXPC-3和SW1990细胞中过表达IGF2BP2,发现IGF2BP2促进了细胞增殖。相比之下,IGF2BP2敲低减少了BXPC-3细胞的增殖。在BXPC-3细胞中敲除了IGF2BP2,IGF2BP2 KO导致细胞增殖显着降低。在IGF2BP2敲除细胞中过表达IGF2BP2重新表达恢复了细胞增殖能力。并且IGF2BP2 KO导致与干性相关的基因下调。

    IGF2BP2敲低细胞中使用RT-PCR lncRNA profiler进行了分析,发现与对照相比,几个lncRNA表达被调控。包括DANCR,在IGF2BP2敲低细胞中降低了约40%。IGF2BP2过表达上调DANCR,IGF2BP2 KO抑制了DANCR表达。由于DANCR可以促进癌症干性,所以DANCR作为下一部研究对象。在BXPC-3和SW1990细胞中过表达DANCR。CCK8分析表明DANCR的过表达促进了细胞增殖并增加了肿瘤成球能力。qRT-PCR检测到,干性相关的基因(OCT4,NANOG,BMI1,CD24和CD133)在DANCR过表达中表达显着上调。FACS分析检测到CD24 +和CD133 +细胞群明显上调。

    与载体对照相比,BXPC-3细胞中的DANCR过表达显着提高了肿瘤的生长速度和肿瘤的大小。DANCR KO抑制了肿瘤生长和肿瘤大小。在该原位模型中,DANCR KO对肿瘤生长的抑制作用甚至比皮下注射的抑制作用更大。

    RIP分析显示,与IgG对照相比,IGF2BP2显著富集DANCR。RNA pulldown+WB显示IGF2BP2与DANCR结合。 actinomycin D 处理后发现,GF2BP2-siRNA处理的细胞中,DANCR衰变比对照siRNA处理的细胞快。IGF2BP2 KO还引起了DANCR RNA更快的衰变,表明IGF2BP2可以提高DANCR RNA的稳定性。IGF2BP家族参与RNA甲基化途径并起RNA稳定剂的作用,为了确定DANCR是否受到RNA甲基化(m6A)的影响,从而使甲基化的DANCR被IGF2BP2识别,我们使用m6A抗体进行了RIP分析,并确定DANCR的富集程度是IgG对照的6倍。RNA pulldown+WB验证了这一结果,检查DANCR序列,我们在664号核苷酸处发现了一个潜在的m6A基序,突变后m6A水平显著降低。这些结果表明,与许多其他mRNA一样,DANCR也可以在m6A处被甲基化。IGF2BP2用作甲基化DANCR的阅读器,以增加其稳定性。

    研究发现胰腺癌中IGF2BP2的上调与不良的临床预后相关。IGF2BP2与DANCR共同起作用以调节其稳定性。在肿瘤细胞中,IGF2BP2上调,这增加了IGF2PB2与DANCR相互作用并使其稳定的机会,尤其是当RNA甲基化机制失调时。在肿瘤细胞中,IGF2BP2上调,这增加了IGF2PB2与DANCR相互作用并使其稳定的机会,尤其是当RNA甲基化机制失调时。