circRNA在糖尿病中介导视网膜血管功能障碍
最新circRNA文章——首次揭示circRNA在糖尿病中介导视网膜血管功能障碍
近期，来自复旦大学，南京医科大学的研究人员发表了题为“Circular Non-Coding RNA HIPK3 Mediates Retinal Vascular Dysfunction in Diabetes Mellitus”（IF=19.3） 的文章，首次揭示circHIPK3在糖尿病引起的视网膜血管功能障碍中的关键作用和调控机制。
研究简介
circRNA已被证明在血管性疾病、神经障碍和癌症中异常表达，然而其在糖尿病诱导的血管内皮功能紊乱中的作用尚未见报道。作者利用采用qPCR、Sanger测序、northern blot等 检测糖尿病相关应激的circHIPK3表达模式。MTT,EdU,transwell 和 matrigel assays体外检测circHIPK3在视网膜内皮细胞功能中的作用。视网膜胰蛋白酶消化，血管通透性测定，ELISA测定法检测circHIPK3在视网膜血管功能障碍中的作用。生物信息学分析、荧光素酶活性分析、RNA pull down、体内研究，揭示了circhipk3介导的视网膜血管功能障碍的机制。最后验证circhipk3作为miRNA海绵吸附miR-30a-3p，增强VEGFC, FZD4和 WNT2的表达，参与调控视网膜血管功能障碍。
研究方案
1、cirRNA的筛选
根据报道，circHIPK3在人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）中高表达。circBase 检索发现HIPK3宿主基因可能产生20个circRNA，作者对这些候选的circRNA进行PCR鉴定发现人和小鼠的视网膜内皮细胞各存在4和2个circRNA, RNase R处理后检测到2个人circRNA和1个小鼠circRNA。最后选择与小鼠circRNA保守的人circHIPK3进行下一步验证。
2、cirRNA的表达模式
作者利用qPCR和northern blot，sang测序，结合RNAse 处理验证circHIPK3的客观存在，利用核质分离PCR和FISH检测circHIPK3的亚细胞定位。并验证其在糖尿病小鼠模型和高糖细胞中高表达。
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