大鼠心肌细胞 RCM

   高度分化的心肌细胞几乎没有分裂能力，它们在a-肾上腺素的刺激下通过Ras/MEK途径发生肥大生长。所有的心肌细胞都能自律性的将膜去极化和复极化。所有的心肌细胞收缩都是肌源性的，不受神经系统刺激。心肌细胞具有复杂的信号网络，从而调节其在心脏节律性的泵出功能中的作用。心力衰竭时，心肌细胞的肥大和凋亡导致心肌收缩功能的下降。更好地了解心脏信号系统有助于揭示心肌细胞死亡的细胞机制。

   RCM是从出生2天大鼠的心脏分离得到的，原代冻存，冰冻运输。每管细胞密度超过1×10^6/ml。细胞特性经肌球蛋白（myosin）、sacromeric alpha-actinin 和原肌球蛋白免疫荧光鉴定。本细胞经检测不含支原体、细菌、酵母菌和真菌。如采用ScienCell实验室提供的培养条件，可保证此细胞继续的培养。HCM因为不能增殖，故不能够扩大或长期培养。

分离方法：

大鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养，用无血清培养基，呈杆状，横纹清楚，在培养基里细胞不搏动。大鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离，浓度为1mg/ml（用无钙台氏液配制），同时酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠开胸后，迅速取出心脏，放入冰的台氏液中，找到主动脉后，挂上Langendorff装置，衡流泵灌入无钙台氏液（37度），开始心脏会搏动几下，这样把心脏中的淤血挤出（此处也有人用有钙台氏液灌流，好让心脏充分搏动，把淤血挤出，不过我们摸索发现只要取心脏到挂上去的时间短，一般搏动几下就能把淤血清楚干净了）。

几分钟后，换酶液开始灌流心脏，一般开始时，心脏较软，待消化一段时间后变硬，继续消化后又变软，且心脏发白，这时候就可以停止消化，将心室剪下，放入KB液中，用剪刀剪碎后，用滴管吹打，取上清，继续加入KB液，吹打，直到上清液不浑浊为止，一般吹打3－4次即可。将各次上清合并，吹打过滤后，沉降20分钟左右，弃上清，加入无血清培养基（MEM，不含L－谷氨酰胺，并加入肌酸，牛磺酸，BSA，肉毒碱，HEPES），吹打，1000转/分离心半分钟，弃上清，再洗1－2次后，将沉淀加入到6％的BSA中沉降15－20分钟（纯化心肌细胞），然后计数，点板或培养。

此法中如果各步注意无菌操作，最后先用加倍双抗的培养基培养24h后，再换正常培养基，可适用于条件不是很好的试验室。如果能在板或瓶内加入Laminin处理后，贴壁很好。如果分离出来的心肌细胞，逐级复钙后培养，状态更好。最佳状态此中方法能培养7天以上。