Adam12 和 lnc015192能够竞争性吸附miR-34a调节乳腺癌的发展

lncRNAs在多种癌症的发展中具有重要的作用。但是，lncRNAs在乳腺癌中的功能还不是很清楚。Xiaoming Xie等带领其团队探究了在敲除miR-34a和WT小鼠乳腺癌组织中mRNAs和lncRNAs的差异表达情况，并于2018.08.17发表在Oncogene杂志（IF=7.5）中。在本文中，作者做了一系列的实验去探究mRNAs和lncRNA在乳腺癌中的功能。结果发现，在敲除miR-34a小鼠的乳腺癌组织中，Adam12 和 lnc015192显著上调。下调Adam12 和 lnc015192能够抑制乳腺癌细胞的迁移、侵袭和EMT。并且进一步实验也揭示了Adam12 和 lnc015192能够作为内源竞争性RNA（ceRNA）竞争性调节miR-34a。总之，研究证明Adam12 和 lnc015192能够通过竞争性吸附miR-34a促进乳腺癌迁移。

技术路线

结果
1.敲除miR-34a小鼠的mRNA表达谱

2.下调Adam12能够抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移

图1

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚类图分析展示了上调和下调的20和mRNA的表达情况。 b. GO分析差异mRNA的功能。 c. KEGG pathway分析差异mRNA的信号通路。d. Reactome pathway分析差异mRNA。e. qPCR检测Adam12在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌细胞中的表达。f. qPCR检测Adam12在乳腺癌细胞系中的表达。g. WB检测Adam12在乳腺癌细胞系中的表达。h. qPCR检测下调Adam12的效率。i. WB检测下调Adam12的效率。j. 侵袭实验。k. WB检测MET相关marker。l. qPCR检测MET相关marker。m.来自肺转移结节的荧光信号。n. 肺转移结节和HE染色。

3. Adam12是miR-34a的靶基因

图2

a. 预测Adam12和miR-34a的结合位点。b. qPCR检测miR-34a在12组乳腺癌细胞系中的表达。c. 荧光素酶报告实验。d. qPCR检测转染miR-34a后，Adam12的表达情况。e. WB检测转染miR-34a后，Adam12的表达情况。f. 侵袭实验。g. WB检测MET相关marker。h. qPCR检测MET相关marker。i. 来自肺转移结节的荧光信号。j. 肺转移结节和HE染色。

4. 敲除miR-34a的lncRNA表达谱

5. 下调lnc015192能够抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移

图3

a. 在敲除miR-34a和WT小鼠小鼠中，聚类图分析展示了上调和下调的20和mRNA的表达情况。 b. qPCR检测lnc015192在敲除miR-34a和WT小鼠中乳腺癌细胞中的表达。c. 使用CPC和CPAT程序对lnc015192进行分析，预测lnc015192是一个non-coding RNA。 d. qPCR检测lnc015192抑制剂对lnc015192的抑制情况。 e. 侵袭实验。f. WB检测MET相关marker。g. qPCR检测MET相关marker。h. 来自肺转移结节的荧光信号。i. 肺转移结节和HE染色。

6. lnc015192是miR-34a的靶基因

图4

a. 预测lnc015192与miR-34a的结合位点。b. qPCR检测lnc015192的表达水平。 c. 荧光素酶报告实验。d. qPCR检测转染miR-34a后，lnc015192的表达情况。e. WB检测转染miR-34a后，lnc015192的表达情况。f. 侵袭实验。g. WB检测MET相关marker。h. qPCR检测MET相关marker。i. 来自肺转移结节的荧光信号。j. 肺转移结

节和HE染色。

7. lnc015192 和Adam12通过调节miR-34a互为ceRNA

图5

a. 在细胞中，RIP实验验证miR-34a和lnc015192结合。b. RIP实验展示lnc015192，Adam12和miR-34a在Ago2上的富集情况。c. 转染sh-015192后进行RIP实验。d. 转染sh-Adam12后进行RIP实验。e. 转染sh-015192后的miR-34a的表达水平。f. qPCR检测转染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表达水平。h. WB检测转染sh-015192和miR-34a后，Adam12的表达水平。i. qPCR检测转染sh-Adam12和miR-34a后，Adam12的表达水平。