乙醇通过FoxO1调控肝细胞miR-148a依赖性TXNIP过表达促进细胞焦亡

酒精性肝病（ALD）是慢性肝病死亡的主要原因之一。但其发病机制尚未完全确定。2018年2月Heo MJ 在Gut（IF=17.01）上发表论文探讨了ALD对肝细胞中miRNA的失调，以及肝损伤的影响。本研究通过检测酒精肝炎（AH）患者、动物肝脏组织以及肝细胞中miR-148a的水平，证实了乙醇可通过激活miR-148a依赖性TXNIP过表达介导的NLPR3炎性小体的活化诱导肝细胞焦亡，为减少ALD的发生率和进展提供了新的靶点信息。

技术路线：

结果：

1.miR-148a在AH和ALD动物模型中失调

Fig1

A.miRNA下调的聚类图；B.PCR检测 AH患者 miR-148a；C. PCR检测小鼠肝脏miR-148a;D病理学检测、以及血清中ALT和TG的含量变化；PCR检测小鼠原代肝细胞和AML-12细胞中miR-148a的变化。

2.FoxO1为miR-148a的转录因子

Fig2

A.筛选目的基因；B，PCR检测AH患者肝脏中FoxO1的表达量；C PCR检测过量饮酒小鼠肝脏中FoxO1的表达量；D.WB检测FoxO1，FoxO3a蛋白表达。

3. FoxO1诱导miR-148a的转录

Fig3

A. 在人体肝脏样本中FoxO1与miR-148a的相关性；B.在小鼠肝脏样本中FoxO1与miR-148a的相关性；C.转染Mock或FoxO1的AML-12细胞中miR-148a表达增多；D.Chip验证FoxO1与miR-148a启动子区相结合；E. 荧光素酶报告基因检测。

4.由乙醇引起miR-148a的失调可以导致TXNIP的过表达

Fig4

A. 确定miR-148a的靶基因；B.PCR检测AH患者TXNIP含量；C.PCR,WB检测小鼠肝脏中TXNIP的基因和蛋白表达含量；D检测乙醇处理原代肝细胞中TXNIP的表达；E.转染miR-480a mimic和miR-480a ASO后，检测TXNIP的表达；F.双荧光素酶报告基因实验；G.miR-480a转染乙醇处理的小鼠肝细胞，检测TXNIP的基因和蛋白表达。

5.乙醇激活肝细胞NLRP3炎性小体

Fig5

A.NLRP3、Pycard、II1b聚类图；B.乙醇处理后可增加原代肝细胞和AML-12细胞中NLRP3、Caspase-1、ASC的表达；D. TXNIP，NLRP3免疫荧光染色；E.免疫共沉淀和WB检测Caspase-1、ASC、TXNIP蛋白表达；F. 转染miR-480a激光共聚焦检测TXNIP，NLRP3；G.流式检测Caspase-1/PI双阳性数量。

6.氯磷酸盐处理小鼠肝细胞导致炎性因子激活

Fig6

A、B组织病理学染色；C.WB检测相关蛋白；D.血清ALT和AST的活性；E.免疫组化染色检测TXNIP和caspase-1。

7.肝细胞特异性传递miR-480a改善肝损伤

Fig7

A.组织病理学染色；B.WB检测相关蛋白；C. 免疫组化染色检测TXNIP和caspase-1；D.肝比重和血液生化指标；E.乙醇诱导细胞焦亡的机制