m6A(N6-methyladenosine)是mRNA的修饰方式之一,在发育、生理和疾病中起关键作用。m6A的研究一直以来存在一个问题:m6A化学计量无法量化。接下来提到的方法很好的解决了这一问题。Garcia-Campos等人开发了MAZTER-seq,这一方法不仅可以从头检测m6A位点,对甲基化进行定量,还可以对亚细胞、不同类型细胞以及疾病不同状态的m6A进行定量分析。
MAZTER-seq是基于一种RNA酶MazF。这种还酶特异性从头切割无甲基化修饰的ACA位点,对酶处理过的片段经处理后进行反转录,对cDNA产物进行测序
对测序结果进行分析计算,量化m6A:
该方法的局限之一在于,只能识别ACA位点的甲基化,而ACA只占DRACH的16%左右。但无论如何,这一方法的发表推动了m6A研究领域的发展,为m6A的研究提供了新思路。