nature methods报道分析自噬的新标志：p-ATG16L1-s278

   自噬是一种高度保守的经溶酶体介导的对细胞内蛋白质和细胞器进行降解、维持细胞内环境的自身稳定的过程。它在正常生理过程和许多疾病中都发挥着重要调节作用，也一直是研究的热点之一。
   对自噬水平的检测方法也很多，这里简要介绍一些。首先是电子显微镜对自噬体的观察。在超微结构水平上，自噬体是一种双层膜结
构，包裹着尚未消化的胞内细胞器。在电子显微镜下观察到双层膜自噬体结构是确认自噬体结构的金标准，其数量和大小也是自噬水平的标志。其次是标志物 LC3/Atg8和 p62/SQSTM1的检测。最后是自噬流检测。bafilomycin A1等自噬相关工具药物处理后检测LC3B-I/II转化水平。GFP-LC3B融合蛋白标记；通过游离GFP蛋白或者荧光显微镜观察GFP信号的点状聚集评价自噬流水平。mRFP/mCherry-GFP-LC3B串联荧光蛋白检测自噬流水平。根据两种荧光蛋白在自噬溶酶体中的不同耐受能力而反映自噬流水平。
  近期国际顶级生化研究方法杂志nature methods上发表一篇使用p-ATG16L1-s278检测自噬水平的文章，小编在这推荐给大家。
 

  前人报道中指出ULK能调节ATG16L1第278位丝氨酸的磷酸化，作者为了进一步研究该位点修饰的功能，开发了这点该修饰的特异性抗体。在证明该抗体的特异性后，作者指出：在多重刺激诱导的自噬下，p-ATG16L1-s278是一种保守的自噬激活指示。如图一所示。免疫荧光分析结果也显示了p-ATG16L1-s278在自噬激活后被募集至自噬体膜上。同时，p-ATG16L1-s278水平提供了一种独立于后期自噬阻滞的可靠的自噬率测量，并直接反映了自噬囊泡的形成。

                                图1在多重刺激诱导的自噬下，p-ATG16L1-s278是一种保守的自噬激活指示
   作者认为：在一个定义明确的系统中，p-ATG16L1-s278水平变化与LC3B-II一致。然而，在缺乏溶酶体抑制剂的情况下p-ATG16L1-s278很有可能获得了更可靠的结果。这种分析的可靠性很可能是在更具技术挑战性的实验中获得更大的收益，如极少的细胞数了或不适合药物处理的情况。在内源性水平检测自噬的应用中，p-ATG16L1-s278抗体在各种组织、不同实验中都能更方便有效的发挥效果。此外，对p-ATG16L1-s278的分析可能会开辟研究自噬的诱导和调控机制的新途径。
   最后，作者强调：我们还没有确定在特定条件下仅使用p-ATG16L1-s278分析自噬有没有误导的困难，但这很有可能存在。因此，结合多种自噬分析方法仍然是自噬研究关键。尽管如此， p-ATG16L1-s278对于自噬研究者来说，这是一个令人兴奋的工具。