肝细胞外泌体miRNA与巨噬细胞

   肝巨噬细胞可以被许多因素激活，巨噬细胞向促炎表型（M1）极化是非酒精性脂肪肝疾病（NAFLD）进展中的一个重要事件。外泌体可通过转移各种生物成分介导细胞间的通讯，外泌体是否参与肝细胞与巨噬细胞之间的通讯，进而影响NAFLD疾病进展， Hepatology新发表的一篇文章告诉你答案。

思维路线：

结果：
1. 血清miR-192-5p与NAFLD病理特征相关
   NAFL和NASH患者的血清miR-192-5p水平均高于对照组, 与ALT和AST水平呈正相关。

2. 血清miR-192-5p水平与肝巨噬细胞激活相关
   HFHCD喂养大鼠，第4周出现肝脂肪变性，第8周患上脂肪性肝炎。血清miR-192-5p与疾病进展相关。检查大鼠肝CD68 + CD86 + M1细胞，发现第8周CD68 + CD86 + M1的数量显著增加，M1特异性细胞因子如iNOS、IL-6、TNF-α也增加。相反，M2型巨噬细胞的标志物Arg1表达水平降低。

3. 脂毒性肝损伤时肝细胞源性外泌体miR-192-5p增加
   从NASH患者中分离出血清外泌体大小分布为50-200 nm，典型尺寸约为100 nm。表达成熟外泌体标记CD63和CD81，还表达肝细胞标记蛋白ASGPR1和CYP2E1。测量NASH患者血清中的外泌体数量，发现NASH患者和HFHCD喂养大鼠均向血清中释放更多外泌体，PA处理的人肝癌细胞系还释放出更多外泌体。表明在肝脂毒性损伤的情况下，肝细胞释放出更多外泌体。NASH患者、HFHCD喂养大鼠、PA处理的HepG2细胞中分离出的外泌体含有更多的miR-192-5p。

4. 脂毒性肝细胞源性miR-192-5p诱导巨噬细胞的激活
   THP-1巨噬细胞在6小时后可有效摄取肝细胞来源的外泌体，PA处理的HepG2细胞衍生的外泌体剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞中的miR-192-5p水平，iNOS，IL-6、TNF-α的上调和CD11b + CD86 +细胞增加都显示出M1巨噬细胞活化， M2巨噬细胞不受影响。

5. Rictor是THP-1巨噬细胞中miR-192-5p的直接靶标
   序列比对表明miR-192-5p具有野生型Rictor的3’UTR结合位点，Rictor是炎症和免疫反应的重要调节剂。荧光素酶报道基因实验显示，miR-192-5p的过表达抑制野生型Rictor的活性，miR-192-5p抑制剂增加野生型Rictor的荧光素酶活性，对突变型Rictor 无影响。miR-192-5p的过表达抑制Rictor蛋白的表达，miR-192-5p抑制增加Rictor的表达。miR-192-5p的过表达降低p-Akt水平，抑制miR-192-5p则增加p-Akt水平。PA处理HepG2细胞来源的外泌体也显著降低THP-1细胞中Rictor蛋白的水平，可被miR-192-5p抑制剂逆转。

6.外泌体miR-192-5p是PA介导的M1巨噬细胞激活的关键因素
   miR-192-5p可增加M1巨噬细胞标记基因（iNOS、IL-6、TNF-α），但不影响M2巨噬细胞标记基因表达，CD11b + CD86 +细胞显着增加，CD11b + CD206 +细胞没有变化。表明在THP-1巨噬细胞中miR-192-5p的过表达显著诱导M1极化。THP-1细胞中敲低Rictor也诱导M1巨噬细胞激活。NASH患者的血清外泌体诱导iNOS增加3倍，IL-6增加10倍，TNF-α增加2倍，这种增加可被miR-192-5p抑制剂阻断。

7.miR-192-5p对RICTOR / AKT / FOXO1信号的影响
   FoxO1和糖原合酶激酶3β（GSK3β）都是Rictor / Akt1信号通路重要的下游靶标。miR-192-5p的过表达降低p-FoxO1表达水平，但不影响p-GSK3β。敲除Rictor会降低p-FoxO1和p-GSK3β在THP-1细胞中的表达。miR-192-5p在抑制HepG2细胞中Rictor / Akt1 / FoxO1信号传导方面具有与PA处理相似的作用。PA处理或miR-192-5p模拟物可降低Rictor、p-Akt和p-FoxO1的蛋白质水平。

总结：
   肝细胞源性外泌体miR-192-5p在炎症性巨噬细胞激活中起关键作用，可以通过Rictor / Akt / FoxO1信号通路诱导巨噬细胞激活，调节NAFLD疾病进展。血清外泌体miR-192-5p代表NAFLD / NASH疾病潜在的非侵入性的生物标志物和治疗靶标。