厉害了-自噬相关蛋白调控免疫细胞
自噬是细胞内进化保守的分解代谢过程。研究发现，自噬已成为T细胞代谢的关键参与者，自噬基因影响T细胞的增殖和存活。一篇文章向大家阐述了自噬的厉害。
思路：
结果：
1.T细胞中Pik3c3的缺失会重新编程基因表达
条件性敲除T细胞中Pik3c3的小鼠（Pik3c3f/f;Cd4-Cre）表现出严重的持续性炎症，血清TNF、IFNG /IFN-γ、CCL2 / MCP-1和IL6升高。前期研究发现这些小鼠表现出T细胞部分丢失，脾脏、肝脏和淋巴结中NK细胞、γδT细胞、DC和B细胞的总百分比增加。RNA测序显示CD4+T细胞中Pik3c3缺乏诱导89基因上调和1492基因下调，包括Pik3c3，通路富集分析表明在缺乏Pik3c3的CD4+T细胞代谢改变。Pik3c3缺乏的CD8A+T细胞中诱导54基因上调或30基因下调，通路分析发现细胞代谢未改变，影响最大的通路与唾液分泌、MAPK有关。在CD4+T中，许多代谢相关的基因上调10倍以上， 其他Th细胞转录因子的表达无差异。
2.删除Pik3c3会导致线粒体功能和活化T细胞代谢改变
抗CD3E和抗CD28抗体刺激脾细胞，Pik3c3缺陷T细胞比例比对照T细胞明显减少, 表明共刺激Pik3c3缺乏的T细胞导致大量细胞死亡。因为自噬是维持ATP所必需的，接下来通过测量耗氧率（OCR）和细胞外酸化率（ECAR）的变化分析激活T细胞中线粒体呼吸和糖酵解，发现Pik3c3缺乏降低活化CD4+和CD8A+T中的OCR和ECAR，在CD4+T细胞中减少更为显著。Pik3c3f/f和Pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠中CD4+或CD8A+ T细胞的激活导致两种细胞中线粒体染色增加。这些结果表明PIK3C3是T细胞活化过程中维持健康的线粒体负荷必需的，特别是在CD4+T细胞中。
3.T细胞中Pik3c3的缺失抑制Th1细胞分化
接下来评估Pik3c3缺陷是否调节Th细胞分化。不同极化条件下培养分选的Pik3c3缺乏和完整的CD4+SELL/CD62L+T细胞，抗CD3E抗体重新激活细胞，发现在不同极化条件下培养的幼稚CD4+T细胞在删除Pik3c3时对细胞死亡具有不同敏感性。在Th1细胞条件下，在缺乏Pik3c3时IFNG产生的比例减少，Th2、Th17和Treg条件下培养的细胞无差异。
4.T细胞中Pik3c3缺乏抵抗EAE诱导
由于缺乏Pik3c3的CD4+T细胞经历严重的凋亡，并表现激活后静态表型以及未能分化为Th1细胞，推测Pik3c3缺失会抑制自身免疫反应的发展。采用多发性硬化症的EAE模型测试T细胞中Pik3c3缺失是否导致EAE诱导的抗性。结果显示pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠能完全抵抗EAE，MOG特异性IFNG+CD4+T细胞大大减少，IL17+CD4+T细胞也减少。BECN1-PIK3C3复合体在经典自噬和LAP途径 至关重要。为排除Pik3c3缺失介导的EAE耐药涉及LAP的可能性，研究rubcn-/-小鼠发展EAE的能力。所有rubcn-/-小鼠有EAE体征出现。繁殖诱导删除Pik3c3的pik3c3f/f; Rosa26-CreERT2小鼠，4-OH他莫昔芬处理ER-Cre+细胞保护EAE。老鼠接受4-OH他莫昔芬处理的ER-Cre +细胞过继转移表达明显降低CNS浸润的PTPRCb CD45.2+细胞和CD4+T细胞的比例。这些数据表明PIK3C3在自身免疫反应的诱导和效应阶段起关键作用。
5. T细胞特异性Pik3c3缺失未改变肿瘤转移
为确定Pik3c3在肿瘤转移中的重要性，在Pik3c3f/f和pik3c3f/f;Cd4-Cre小鼠注射肺癌细胞或B16黑色素瘤细胞，并监测肺肿瘤定植。Pik3c3f/f小鼠具有类似的LLC和B16黑色素瘤肿瘤负担，pik3c3f/f; Cd4-Cre小鼠中CD4+T细胞、CD8A+T、MDSCs和CD8A+T细胞的频率降低，CD44+SELL-T细胞频率增加。Pik3c3缺乏并未改变PTPRC/CD45+细胞的抗LLC肿瘤功能。这些表明，T细胞中Pik3c3的缺失限制效应细胞清除肿瘤转移的功能。
