外泌体是如何破坏了血管的完整性？
外泌体在细胞间通讯中起着关键作用，因为它们包含信号分子和遗传物质，正因为此，外泌体有关的高分文章层出不穷。在肿瘤发生过程中，已经证明肿瘤来源的外泌体促进肿瘤血管生成和转移。
今天我们讲述一篇关于外泌体通过触发内皮细胞中的内质网应激来破坏血管完整性的文章，该文章题名为：“Exosomes derived from HeLa cells break down vascular integrity by triggering endoplasmic reticulum stress in endothelial cells”，发表在J Extracell Vesicles期刊上，影响因子： 11。本文探索了HeLa细胞来源的外体(海拉癌细胞株)及其相关机制。该研究发现，HeLa细胞来源的外泌体通过触发内皮细胞中的内质网应激和破坏内皮完整性来促进转移。外泌体的这种作用是不依赖于微核糖核酸的。
结果一、海拉癌细胞株破坏内皮细胞的TJs，破坏内皮细胞单层的屏障功能
要获得外泌体（Exo）的效果海拉癌细胞株在内皮单层的通透性上，检测癌细胞(Siha/GFP)的跨内皮侵袭。有更多的绿色荧光蛋白标记的Siha细胞通过胞外迁移海拉癌细胞株-经处理的人脐静脉内皮细胞单层与经PBS或正常人脐静脉内皮细胞外体处理的人脐静脉内皮细胞单层相比(外体HCEC)。体外循环治疗血管内皮细胞瘤海拉癌细胞株与用Exo处理的荧光探针相比，显著增加了荧光探针通过电子传输层的次数HCEC或PBS。免疫荧光染色显示，在用Exo处理后，人脐静脉内皮细胞单层中的ZO-1和CLDN5均显著减少海拉癌细胞株，但不适用于PBS或ExoHCEC。
结果二、海拉癌细胞株血管通透性增加体内
为了进一步证明Exo的效果海拉癌细胞株内皮屏障体内，小鼠被注射了海拉癌细胞株或ExoHCEC通过尾静脉注射FITC葡聚糖。在外耳道检测到FITC-葡聚糖从耳朵血管中严重泄漏海拉癌细胞株-，但不是在ExoHCEC-或PBS处理的小鼠。在肺和肝中也观察到类似的结果，因为在肺切片中检测到更多的荧光和肝脏。在肺CD31阳性的内皮细胞中检测到明显较少的ZO-1和CLDN5。这些结果表明，海拉癌细胞株治疗导致内皮细胞中TJ蛋白的下调，这增加了不同器官中的血管通透性。
结果三、海拉癌细胞株促进肿瘤转移体内
将小鼠乳腺癌4T1细胞用荧光素酶基因转导并植入小鼠，连续3周每天注射外泌体，确定Exo是否海拉癌细胞株治疗可以促进肿瘤转移。在Exo中检测到明显更多的远处转移海拉癌细胞株-通过发光分析处理的小鼠，而三组之间原发肿瘤的大小没有显著差异。在Exo中检测到超过两倍的肺转移海拉癌细胞株-与Exo相比，处理过的小鼠HCEC-处理过的小鼠。
结果四、外体微小核糖核酸没有引起TJs的下调
海拉癌细胞株-诱导内皮完整性的恶化，对内皮细胞的增殖和TJ蛋白与其他蛋白(VEGFR2，E2F1)在曲拉通处理后被逆转，表明外泌体内部的成分是抑制作用的原因。由于外泌体的微小核糖核酸(miRNAs)在外泌体介导的效应中起重要作用，外泌体中所有的微小核糖核酸都被测序和分析。结果显示，用miRNA抑制剂预处理人脐静脉内皮细胞并不能逆转内皮细胞中ZO-1或CLDN5的下调海拉癌细胞株。在HeLa细胞中DICER蛋白下调了约70%，DICER基因敲除并没有减弱HeLa外体对人脐静脉内皮细胞TJ蛋白的下调作用，表明miRNAs可能不参与HeLa外体对TJ蛋白的抑制作用。
结果五、抑制泛素化或自噬都不能逆转ZO-1和CLDN5的蛋白水平
检查Exo是否海拉癌细胞株-通过增强的泛素化途径诱导TJ蛋白的下调，蛋白酶体抑制剂MG132与Exo一起被加入到人脐静脉内皮细胞培养物中海拉癌细胞株。结果显示，MG132没有逆转Exo的抑制作用海拉癌细胞株CLDN5和ZO-1的表达，表明泛素化途径可能不参与TJ蛋白的下调，TJ蛋白的减少不是通过外切海拉癌细胞株诱导自噬。
结果六、海拉癌细胞株诱导内皮细胞内质网应激
为了确定Exo的影响海拉癌细胞株在内皮细胞上，通过比较体外培养前后内皮细胞的基因序列，分析内皮细胞基因表达的变化海拉癌细胞株治疗。GO分析和途径分析确定了细胞功能的主要变化，如细胞存活、迁移和粘附、增殖、核糖核酸表达和炎症。这些数据表明内皮细胞经外源性细胞外基质处理后诱发了内质网应激海拉癌细胞株。有趣的是，钙网蛋白和LAMP1的点，而不是GM130，随着外泌体治疗的进展而增加，表明内质网和溶酶体内的同质性改变，并且内质网应激是内皮细胞TJ蛋白下调的原因。
结 论:
海拉癌细胞株引发内皮细胞的内质网应激，即来自癌细胞(如HeLa细胞)的外体成分可触发受体细胞中的内质网应激。该研究可能为肿瘤转移提供一种新的机制，并可能成为一种潜在的新的治疗靶点。需要进一步的研究来确定引发内质网应激的外体成分的细节。