miRNA介导胰腺癌化学耐药性

    胰腺导管腺癌（PDAC）作为最致命的胃肠道恶性肿瘤，是癌死亡的第四大原因。基于吉西他滨（GEM）的化疗方案是癌症治疗的重要组成部分，但化疗抵抗是PDAC治疗的主要挑战。癌症中miRNA表达失调可能是导致改变生物过程的关键因素，包括化学抗性。今日，小编分享给大家一篇关于PDAC化学耐药性研究的文章。
技术路线：

结 果：
1. 耐GEM的PDAC细胞中MiR-146a-5p异常下调，并与PDAC患者预后不良相关
    培养GEM抗性的PDAC细胞系（MiaPaCa-2-GR和SW1990-GR细胞），miRNA微阵列用于分析MiaPaCa-2-GR细胞与它们亲代细胞之间同时上调或下调的miRNA，结合数据库发现miR-146a-5p在所有PDAC-GR细胞系中均下调，比亲代细胞表达低，表明miR-146a-5p在调节化学抗性中有潜在作用。进一步研究发现miR-146a-5p在PDAC肿瘤中低表达，且其表达与临床病理特征无显著关系，miR-146a-5p的下调与更短的预后相关。

2. MiR-146a-5p抑制PDAC细胞增殖和化学耐药性
    miR-146a-5p的过表达显著抑制PDAC细胞的增殖和集落形成能力。用各种浓度的GEM处理PANC-1和SW1990细胞持续48小时，发现GEM的IC50值在转染miR-146a-5p模拟物的PDAC细胞中显著降低，表明miR-146a-5p增强GEM的细胞毒性。抑制miR-146a-5p表达有相反效果。诱导凋亡是GEM抗肿瘤作用的关键机制，发现GEM诱导的细胞凋亡比率在转染miR-146a-5p-mimic的细胞中增加，而miR-146a-5p的下调抑制GEM处理导致的细胞凋亡。这些结果表明miR-146a-5p不仅抑制细胞增殖，而且增强GEM的细胞毒性。

3. MiR-146a-5p可敏化胰腺异种移植肿瘤的化疗疗效
    建立PDAC异种移植模型，当移植小鼠出现明显的异种移植肿瘤，每周两次用miR-146a-5p和GEM治疗。miR-146a-5p agomir处理的异种移植肿瘤组织中miR-146a-5p的表达水平升高，肿瘤大小和重量显著降低，GEM治疗后进一步减少。miR-146a-5p agomir和GEM治疗细胞增殖受到抑制，细胞凋亡明显增加。这些结果表明，miR-146a-5p可以抑制肿瘤生长并使PDAC细胞对GEM治疗敏感。

4. MiR-146a-5p靶向TRAF6的3'-UTR并抑制其表达
    通过各种数据库确定TRAF为miR-146a-5p的潜在靶标，miR-146a-5p模拟物处理的细胞TRAF6表达减少，在miR-146a-5p抑制剂处理的细胞中增加。萤光素酶实验确认miR-146a-5p可直接与TRAF6结合并抑制其表达。在36对PDAC肿瘤和邻近的正常组织中检查TRAF6的表达水平，发现RAF6在PDAC组织中的表达明显更高。IHC染色显示TRAF6蛋白在PDAC组织中表达增加，并与更多的阳性淋巴结、分化差、更严重TNM期相关。TRAF6的增加表达与预后较差密切相关。

5. TRAF6介导miR-146a-5p对PDAC细胞的GEM抗性
    在PDAC细胞中敲低或过表达TRAF6，发现沉默TRAF6降低了GEM的IC50值，并提高在PDAC细胞中的细胞毒性作用，而TRAF6过表达会增加IC50值，GEM诱导的细胞凋亡在RAF6-敲低细胞中增加。miR-146a-5p模拟物诱导的较低的IC50可被之后的TRAF6过表达所逆转，miR-146a-5p抑制剂处理的细胞的高IC50值在过表达TRAF6时进一步增加，表明miR-146a-5p 对GEM的作用能被TRAF6 过表达抑制。这些结果表明miR-146a-5p通过直接调控TRAF6可使PDAC细胞对GEM的化学功效敏感。

6. MiR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65 / P-gp轴负调节GEM抗性
    NF-κB p65、P-gp与耐药相关，TRAF6可作为NF-κB的分子桥和关键激活剂。研究发现miR-146a-5p过表达降低了NF-κB p65和P-gp表达水平，而这些蛋白质的水平在miR-146a-5p抑制后明显增加。同样，TRAF6敲低降低NF-κB p65和P-gp的表达水平。miR-146a-5p agomir处理的异种移植肿瘤中TRAF6，NF-κBp 65和P -gp的表达水平降低，数据分析发现TRAF6表达与NF-κBp 65（RELA）和P-gp（ABCB1）的表达呈正相关。这些结果表明miR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp轴调节PDAC细胞的GEM抗性。

总 结：
    1. MiR-146a-5p可抑制PDAC细胞增殖和化学耐药性；
    2. miR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp轴调节PDAC细胞的GEM抗性。