Theranostics:利妥昔单抗通过降低外泌体miR-155含量导致风湿性关节炎患者丙型肝炎病毒血症增加
Theranostics:利妥昔单抗通过降低外泌体miR-155含量导致风湿性关节炎患者丙型肝炎病毒血症增加
越来越多的实验表明生物治疗可以有效地改善类风湿性关节炎（RA）病人的生活质量。类风湿性关节炎病人的治疗面对的一个重要问题是生物治疗引发的免疫抑制，尤其是慢性病毒性肝炎患者。利妥昔单抗(RTX)是一个嵌合单克隆抗体，特异性靶向人B细胞表面的CD20，导致B细胞衰竭。研究发现与TNF-α抑制剂相比，RTX增强丙型肝炎病毒（HCV）活性能力更强，然而相关机制尚不明确。
2018年2月7日Tsai-Ling Liao等人在Theranostics（IF:8.766）发表的文章《Rituximab may cause increased hepatitis C virus viremia in rheumatoid arthritis patients through declining exosomal microRNA-155》发现RTX可以引起B细胞耗竭并且影响细胞内miR-155的产生和外泌体miR-155的迁移，然后增强肝细胞中HCV活性。研究人员通过体外细胞实验探究了外泌体miR-155在RTX引起的HCV活性增强中的作用。通过比较接受不同抗类风湿治疗的HCV感染类风湿性关节炎病人与未受感染的病人或健康人血清中的外泌体含量和外泌体miR-155水平差异，发现循环外泌体miR-155含量与HCV病毒载量负相关，且与RA病人中RTX引起的HCV活性增强有关。因此，研究人员认为外泌体miR-155可能成为潜在的诊断生物标记物或治疗靶点。
技术路线
实验结果
RTX可能影响B细胞来源的抗HCV细胞因子（miR-155）向肝细胞的迁移
图1：RTX可能影响B细胞来源的抗HCV细胞因子（miR-155）向肝细胞的迁移。A)RTX或TNF-α抑制剂（阿达木单抗（ADA），依那西普(ETA)及高利单抗(GOL)）无肝毒性 B）RTX或TNF-α抑制剂不影响HCV在肝细胞的复制 C）Raji细胞上清抑制HCV复制，RTX处理Raji细胞可以部分恢复HCV活性 D) RTX处理的Raji细胞上清可增强HCV复制能力，该过程具有时间依赖性 E)经慢性HCV感染的RA病人外周血细胞中miR-155表达水平显著增强 F)miR-155过表达抑制肝细胞中HCV复制。
RTX可能通过减少B细胞来源的miR-155的产生和外泌体miR-155的迁移水平影响肝细胞中HCV的复制
图2 A)用共培养体系研究外泌体在B细胞和Huh7-HCV复制子细胞间通讯中的作用 B)RTX治疗引起B细胞的消耗 C)用RTX处理Raji细胞其生存能力没有明显变化 D）经RTX处理的Raji细胞中miR-155的含量明显减少 E）经RTX处理的细胞中Raji细胞衍生的外泌体miR-155含量显著降低 F）miR-155从RTX治疗的Raji细胞迁移到肝细胞的数量减少 G)经RTX处理后HCV复制活性增强
3、RTX通过降低B细胞外泌体miR-155表达水平直接影响肝细胞中HCV的复制
图3 A）流程图 B)qRT-PCR结果显示RTX处理后的Raji细胞中miR-155含量减少 C) qRT-PCR结果显示RTX处理后的Raji细胞外泌体miR-155含量减少 D)RTX处理的Raji细胞外泌体导致肝细胞中miR-155的表达降低 E) RTX处理的Raji细胞外泌体使得肝细胞中HCV复制活性增强
RTX相关的HCV血症增多与RA患者外泌体miR-155含量减少相关
(1)HCV感染的RA病人血清中外泌体和外泌体miR-155含量增加
图4 A）免疫印迹结果表明与正常对照和未感染HCV的RA患者相比，HCV感染的RA患者外泌体含量增加，TNF抑制剂可以增加外泌体含量，而RTX可以降低外泌体含量B)ELISA结果表明HCV感染的RA患者血清中外泌体的含量增加 C)HCV感染的RA患者的外泌体miR-155含量增加 D)RTX治疗的RA病人外泌体miR-155表达显著降低 E)左图 RTX比TNF-α抑制剂更大程度地增加了HCV病毒载量 ；右图 RTX治疗的RA病人外泌体miR-155表达显著降低，而TNF-α抑制剂处理后外泌体miR-155表达没有明显差异 F）RTX治疗的患者外泌体miR-155表达明显降低，且呈时间依赖性。
（2）接受RTX治疗的HCV感染RA患者的外泌体miR-155表达水平显著降低
表格1 HCV感染RA患者接受csDMARDs、TNF-抑制剂和rit治疗的人口统计学资料和实验室研究结果*
*值是平均值±标准差或者是患者的数量(%)
CCP胃环瓜氨酸肽; CRP是C反应蛋白; csDMARDs是传统合成的抗风湿性药物; DAS28是28个关节疾病活性评价; ESR为红细胞沉降速度; HCV是丙型肝炎病毒; NA意为不适用; RF指类风湿因子; TNF-α是肿瘤坏死因子α。
结论
B细胞衍生的miR-155通过影响外泌体迁移抑制HCV复制
RTX可以诱发B细胞损耗，影响细胞内miR-155的产生和外泌体miR-155的迁移，然后导致肝细胞中HCV活性增强